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生長(zhǎng)因子 PEG-纖連蛋白水凝膠應(yīng)用

更新時(shí)間:2023-08-15      點(diǎn)擊次數(shù):1028

細(xì)胞外基質(zhì)衍生的基質(zhì)膠含有多種生長(zhǎng)因子。并且它具有支持細(xì)胞增殖、遷移和分化的ECM特性,因此廣泛應(yīng)用于體外細(xì)胞培養(yǎng)。但此類(lèi)基質(zhì)膠成分未知,穩(wěn)定性較差,物理性質(zhì)缺乏可控。因此,開(kāi)發(fā)一種兼具ECM功能和合理設(shè)計(jì)的可控生物材料顯得尤為重要。

格拉斯哥大學(xué) Manuel Salmeron-Sanchez 教授的團(tuán)隊(duì)在《生物材料》雜志上發(fā)表了一篇文章“采用全長(zhǎng)纖連蛋白設(shè)計(jì)的 3D 水凝膠,可隔離并呈現(xiàn)生長(zhǎng)因子"。研究人員利用聚乙二醇共價(jià)結(jié)合全長(zhǎng)的纖連蛋白,制備了一種可以富集和控制生長(zhǎng)因子的PEG-纖連蛋白水凝膠。并證明水凝膠可以結(jié)合血管內(nèi)生長(zhǎng)因子(VEGF)和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP2)促進(jìn)血管生成,實(shí)現(xiàn)骨再生。

FNPEG水凝膠的制備及表征

FN 通過(guò)邁克爾型加成反應(yīng)與 PEG 網(wǎng)絡(luò)共價(jià)結(jié)合,形成 FN 標(biāo)記的 FNPEG 水凝膠。 FN免疫熒光染色和釋放檢測(cè)結(jié)果表明,F(xiàn)N均勻分布在水凝膠網(wǎng)絡(luò)中,結(jié)合穩(wěn)定。 PEG可以控制FNPEG水凝膠系統(tǒng)的物理和化學(xué)性質(zhì)。隨著體系中PEG含量的增加,F(xiàn)NPEG水凝膠的溶脹性能和楊氏模量也顯著提高。此外,添加0.5VPM可降解交聯(lián)劑將增強(qiáng)水凝膠的機(jī)械強(qiáng)度。

FNPEG水凝膠可穩(wěn)定結(jié)合生長(zhǎng)因子

FN可以隨機(jī)與生長(zhǎng)因子結(jié)合,例如通過(guò)FNIII12-14與VEGF結(jié)合。因此,與PEG相比,F(xiàn)NPEG水凝膠可以有效共聚大量生長(zhǎng)因子。研究人員使用熒光標(biāo)記的 VEGF 來(lái)追蹤其隨時(shí)間的釋放。將熒光標(biāo)記的 VEGF 混合到 PEG 和 FNPEG 水凝膠中進(jìn)行釋放實(shí)驗(yàn)。 24小時(shí)后,PEG釋放了所有VEGF,而FNPEG水凝膠保留了50%的VEGF。同時(shí),將PEG和FNPEG水凝膠置于相同濃度的熒光標(biāo)記VEGF中,測(cè)試其結(jié)合VEGF的能力。

結(jié)果表明,每毫升 FNPEG 水凝膠比 PEG 多結(jié)合 2μg VEGF。此外,可降解交聯(lián)劑VPM的存在不會(huì)影響水凝膠與VEGF的穩(wěn)定結(jié)合,表明FNPEG水凝膠可以通過(guò)其自身的降解特性來(lái)控制生長(zhǎng)因子的釋放。

FNPEG水凝膠可促進(jìn)微血管網(wǎng)絡(luò)的形成

PEG和FNPEG水凝膠中HUVEC的存活率沒(méi)有顯著差異。研究人員將接種了HUVEC的微載體封裝到FNPEG水凝膠和Matrigel中,并在培養(yǎng)基中添加VEGF,以研究FNPEG水凝膠在3D培養(yǎng)過(guò)程中促進(jìn)管出芽的作用。在含有VEGF的FNPEG水凝膠中,出現(xiàn)了大量與Matrigel類(lèi)似的血管出芽現(xiàn)象,并且連接的血管芽的面積比Matrigel更多。

研究人員進(jìn)一步將HUVEC和VEGF直接封裝到FNPEG水凝膠中,研究FNPEG水凝膠是否能像Matrigel一樣促進(jìn)三維交換中的血管形成。第1天和第2天,F(xiàn)NPEG水凝膠形成比Matrigel組和含有VEGF的PEG組更寬的血管簇。然而,從第3天開(kāi)始,F(xiàn)NPEG水凝膠中的血管簇開(kāi)始分解,表明這些細(xì)胞復(fù)合物不穩(wěn)定。需要周細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和其他類(lèi)型的細(xì)胞來(lái)穩(wěn)定新形成的毛細(xì)血管。

研究人員使用更復(fù)雜的雞胚尿囊膜來(lái)測(cè)試FNPEG水凝膠是否可以促進(jìn)毛細(xì)血管的形成。添加和未添加 VEGF 的 FNPEG 水凝膠雞胚尿囊膜上毛細(xì)血管的分叉和連接數(shù)量均顯著高于對(duì)照組,表明 FNPEG 水凝膠不僅具有持久持續(xù)釋放 VEGF 的能力,雞胚尿囊膜在發(fā)育過(guò)程中產(chǎn)生的尿囊膜也可保留在原位,促進(jìn)毛細(xì)血管生成。然而,有或沒(méi)有VEGF的PEG水凝膠實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間沒(méi)有顯著差異。進(jìn)一步證實(shí)VEGF在最初的幾個(gè)小時(shí)內(nèi)從PEG中快速釋放,導(dǎo)致VEGF從局部區(qū)域相對(duì)快速地消失。

負(fù)載 BMP2 的 FNPEG 水凝膠促進(jìn)骨骼生長(zhǎng)

研究人員利用成年小鼠構(gòu)建了骨不連(臨界尺寸)半徑缺損模型,并證明負(fù)載BMP2的FNPEG水凝膠可以促進(jìn)體內(nèi)骨骼生長(zhǎng)和修復(fù)。各組件水凝膠管狀支架的骨缺損修復(fù)結(jié)果顯示,隨著B(niǎo)MP2的增加,骨生長(zhǎng)從FNPEG-到FNPEG+再到FNPEG++增加,F(xiàn)NPEG++組實(shí)現(xiàn)骨缺損閉合。番紅-O固綠和蘇木精組織切片染色結(jié)果顯示,F(xiàn)NPEG+和FNPEG++ Hydro植入處有大量膠原沉積。



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