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ozbiosciences脂轉染技術是如何工作的?

更新時間:2024-01-05      點擊次數(shù):598

脂轉染是一種基于脂質的轉染該技術屬于生化方法,還包括聚合物、DEAE葡聚糖和磷酸鈣。

脂轉染原理是將核酸與陽離子脂質制劑結合起來。由此產(chǎn)生的分子復合物(稱為脂質復合物)隨后被細胞吸收。 

脂轉染的主要優(yōu)點是效率高、能夠在多種細胞類型中轉染所有類型的核酸、易于使用、重現(xiàn)性好和低毒性。此外,該方法適用于所有轉染應用(瞬時轉染、穩(wěn)定轉染、共轉染、反向轉染、順序轉染或多重轉染……)、高通量篩選測定,并且在一些體內(nèi)模型中也顯示出良好的效率。

它是如何工作的?

用于脂轉染的脂質試劑通常由合成的陽離子脂質組成,這些脂質通常與輔助脂質(例如 DOPE(1,2-二油酰磷脂酰乙醇胺)或膽固醇)混合。這些脂質混合物在生理 pH 值下組裝在脂質體或膠束中,總體帶正電荷,并能夠通過靜電相互作用與帶負電荷的核酸形成復合物(脂質復合物)。基于脂質的轉染試劑與核酸的結合導致核酸的緊密壓縮和保護,并且這些陽離子復合物主要通過內(nèi)吞作用內(nèi)化。

一旦進入細胞,就會有兩種導致核酸釋放到細胞質中的機制。一種依賴于聚陽離子殘基的內(nèi)體緩沖能力(稱為“質子海綿效應")。另一種描述了細胞帶負電荷的脂質中和轉染試劑的陽離子殘基導致內(nèi)體膜不穩(wěn)定的能力。

最后,導致 DNA 核攝?。╯iRNA 不需要)以及隨后基因表達的細胞和分子事件仍然具有高度推測性。然而,細胞分裂對轉染效率的重要性支持這樣的假設:有絲分裂過程中核膜破壞促進 DNA 核攝取。盡管如此,原代細胞(非分裂)和體內(nèi)的轉染也可以通過脂轉染來實現(xiàn),這證明DNA可以進入發(fā)生基因表達的細胞核。


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