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如何提取游離DNA?

更新時間:2023-12-18      點擊次數(shù):739

cfDNA 的分離、定量和評估并不是一項簡單的任務。它需要敏感且可靠的工作流程。

cfDNA 是一種極其難以處理的樣品類型,因為 cfDNA 的產(chǎn)量通常有限且高度碎片化。這就是 MagVigen™ cfDNA 提取試劑盒(貨號 #K61003)發(fā)揮作用的地方。它可以為 NGS 檢測提供更高產(chǎn)量和更高質量的 cfDNA 樣本(相對于 Qiagen 試劑盒)。




cfDNA 提取工作流程

  1. 1.溶解溶解等離子體樣品。


  2. 2.結合和捕獲:將 MagVigen™ 納米顆粒與樣品混合。納米顆粒與 cfDNA 片段結合。


  3. 3.沉淀和重新分散 1:磁性沉淀珠子直至溶液澄清。珠子響應磁力(通過使用磁鐵,例如磁力分離架),使結合的材料能夠快速有效地與樣品的其余部分分離。通過抽吸除去上清液(未結合的材料),剩下的是納米顆粒結合的目標。然后將珠粒重新分散在洗滌 1 緩沖液中。


  4. 4.轉移:將洗滌 1 溶液轉移至 1.5 或 2ml 管中。


  5. 5.沉淀和重新分散 2:磁力沉淀,按照步驟 3 去除上清液。這次將珠粒重新分散在 75% 乙醇中。


  6. 6.清洗和沉淀 2,3:使用 75% 乙醇清洗珠粒。將珠子沉淀并除去所有上清液。將珠粒重新分散在 75% 乙醇中。執(zhí)行此步驟兩次。


  7. 7.洗脫:高質量 cfDNA 的最終洗脫。為下游 NGS、PCR 或其他應用做好準備。
    2次洗脫有助于提高cfDNA產(chǎn)量。


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