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Duolink® PLA熒光實(shí)驗(yàn)方案

更新時(shí)間:2023-11-28      點(diǎn)擊次數(shù):1095

Duolink® PLA試劑

有關(guān)具體的產(chǎn)品建議,請參閱Duolink® PLA產(chǎn)品選擇指南。簡單來說,要運(yùn)行用于熒光檢測的Duolink® PLP實(shí)驗(yàn),需要以下Duolink® PLA產(chǎn)品:

一、Duolink® PLA探針(一種PLUS和一種來自不同物種的MINUS,與您的一抗宿主物種相匹配)。每個(gè)試劑盒包括:

1.PLA探針(5x— PLUS/MINUS,取決于產(chǎn)品;

2.封閉溶液用于在孵育抗體前封閉樣品;

3.抗體稀釋劑用于稀釋PLA探針,而且如果需要,用于稀釋一抗。

注意:將試劑盒的所有組分存放在4°C溫度下。

注意:如果需要,可用Duolink® PLA試劑盒生成定制的PLA探針。

二、Duolink®熒光檢測試劑(可選擇綠色、橙色、紅色等)

每個(gè)試劑盒包括:

1.連接原液(5x稀釋以制備1x連接緩沖液

2.連接酶 (1 U/μL) – 添加以制備連接溶液

3.擴(kuò)增原液 (5x) – 稀釋以制備1x擴(kuò)增緩沖液

4.聚合酶 (10 U/μL) - 添加以制備擴(kuò)增溶液

注意:將所有組分存放在-20°C溫度下。

三、熒光用洗滌緩沖液。

四、含DAPIDuolin用于載玻片,儲存在2-8°C)或者細(xì)胞核染色劑和抗淬滅劑(用于微孔板,儲存在-20°C


其他材料!

1.檢測目標(biāo)蛋白質(zhì)的一抗。當(dāng)與Duolink® PLA探針一起使用時(shí),必須在小鼠、兔子或山羊中飼養(yǎng)。

2.高純度純水(無菌過濾,Milli-Q®或類似水質(zhì))

3.載玻片上的樣品(細(xì)胞或組織),已經(jīng)過固定、恢復(fù)和透化方面的預(yù)處理。關(guān)于下列主題的相關(guān)建議和詳細(xì)信息,請參閱如何優(yōu)化Duolink®鄰近連接測定:

1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和對照

2.選擇一抗和優(yōu)化

3.樣品處理

設(shè)備

1.熒光顯微鏡,帶有適當(dāng)?shù)臑V光片、照相機(jī)和圖像采集軟件

2.37°C培養(yǎng)箱

3.水平搖床

4.加熱濕度箱或微孔板傳熱座

5.疏水筆,用于給反應(yīng)區(qū)域劃界

6.冰塊(用于酶)

7.染色罐

8.鑷子

9.移液器和吸頭(1 μl1000 μl

10.與熒光顯微鏡兼容的蓋玻片


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