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定量蛋白質(zhì)印跡介紹

更新時(shí)間:2023-08-29      點(diǎn)擊次數(shù):464

什么是定量蛋白質(zhì)印跡?

定量蛋白質(zhì)印跡使不同治療之間的相對(duì)比較成為可能。定量蛋白質(zhì)印跡的目標(biāo)是準(zhǔn)確測(cè)量蛋白質(zhì)表達(dá)的變化。

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蛋白質(zhì)印跡用途

  • 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用

  • 信號(hào)通路

  • 翻譯后修飾

  • 細(xì)胞表面蛋白

  • RNAi分析

為什么我們需要定量蛋白質(zhì)印跡?

改變生活的療法。農(nóng)作物產(chǎn)量增加。我們所有人都希望通過(guò)我們一生的工作做出改變。定量西部片可以成為推進(jìn)發(fā)現(xiàn)并使世界變得更美好的強(qiáng)大工具。

呈現(xiàn)最佳印跡

科學(xué)出版商、資助機(jī)構(gòu)以及生物技術(shù)和制藥公司對(duì)定量蛋白質(zhì)印跡感興趣。近年來(lái),發(fā)表蛋白質(zhì)印跡的期刊標(biāo)準(zhǔn)變得更加嚴(yán)格。5 , 6 , 7 , 8 , 9 了解西方人的理論和技術(shù)對(duì)于獲得準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)定量非常重要。有了更多可信的數(shù)據(jù),我們就能為未來(lái)奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

定量蛋白質(zhì)印跡要求

  • 信號(hào)與加載的蛋白質(zhì)量成正比。

  • 感興趣的蛋白質(zhì)(或“目標(biāo)")在檢測(cè)的線性范圍內(nèi)進(jìn)行定量。

  • 內(nèi)部上樣控制可糾正樣品制備、上樣和轉(zhuǎn)移過(guò)程中不可避免的變化。

除了這些要求外,實(shí)驗(yàn)變異性還應(yīng)保持較低,以便可實(shí)現(xiàn)復(fù)制。

對(duì)于定量分析,您必須驗(yàn)證幾個(gè)條件。條帶強(qiáng)度的差異可能是由實(shí)驗(yàn)變異性(如使用不同的抗體或阻斷劑)或真正的生物學(xué)變化引起的。在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)之前,確定蛋白質(zhì)印跡過(guò)程中變異的來(lái)源以及如何最好地控制它們非常重要。

什么是可變性?

您的結(jié)論將始終基于(并受到)實(shí)驗(yàn)中的變異量的影響。您可以使用 CV(變異系數(shù))、σ(標(biāo)準(zhǔn)差)、r 2(決定系數(shù))或其他全方式來(lái)定義或測(cè)量變異性。減少變異性是最大限度提高精度的關(guān)鍵。

確定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要性是定量西方學(xué)者普遍關(guān)心的問(wèn)題。一種方法是定義已處理和未處理樣本之間頻帶信號(hào)的百分比變化。實(shí)驗(yàn)變化需要大于您對(duì)變異性的測(cè)量,例如 CV。因此,為了對(duì)微小的變化更有信心,請(qǐng)降低實(shí)驗(yàn)中的 CV。說(shuō)起來(lái)容易做起來(lái)難,對(duì)吧?為了始終如一地獲得準(zhǔn)確的答案,請(qǐng)盡可能消除錯(cuò)誤源。



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