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金脂質(zhì)體的制備

更新時(shí)間:2023-07-30      點(diǎn)擊次數(shù):503

以下論文發(fā)表在美國顯微鏡學(xué)會第五十四屆年會論文集上; GW Bailey、JM Corbett、RVW Dimlich、JR Michael 和 NJ, Zaluzec(編輯)。舊金山出版社,加利福尼亞州舊金山,第 898-899 頁(1996 年)。


脂質(zhì)是一類重要的分子,存在于膜、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和其他天然結(jié)構(gòu)中,在結(jié)構(gòu)中發(fā)揮重要作用,并具有多種功能,例如區(qū)室化和運(yùn)輸。合成脂質(zhì)體還廣泛用作藥物、化妝品和其他化學(xué)品的遞送和釋放載體;肥皂是由脂質(zhì)制成的。脂質(zhì)可以形成雙層或多層囊泡、膠束、片、管和其他結(jié)構(gòu)。脂質(zhì)分子可以與蛋白質(zhì)、碳水化合物或其他部分連接。由于缺乏在不進(jìn)行廣泛改變的情況下可視化脂質(zhì)的直接方法,對這種生命必需成分的電鏡研究已經(jīng)滯后。氧化鋨4與膜磷脂中的雙鍵反應(yīng),形成交叉橋。到目前為止,這一直是固定和染色膜的選擇方法。早期的工作描述了使用連接到脂質(zhì)部分的鎢酸鹽簇(W 11 )來形成脂質(zhì)結(jié)構(gòu)和脂質(zhì)探針。 1

隨著金簇的發(fā)展,現(xiàn)在可以將致密的金球2與脂質(zhì)分子共價(jià)且特異性地連接;例如,使單-N-羥基琥珀酰亞胺納米金簇與磷脂酰乙醇胺上的氨基反應(yīng)。金脂肪酸和金磷脂的例子如圖 1 所示。

二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-Nanogold (DPPE-Nanogold,圖 1B),具有 C 16疏水尾鏈,獲自 Nanoprobes, Inc.,3并制成囊泡。將干燥的 DPPE-Nanogold (10 nmole) 重新懸浮于 0.5 mL 甲醇中。將20微升轉(zhuǎn)移至試管中并用氮?dú)饬鞲稍?。添?50 ml 水,并將管在室溫下在浴裝置中超聲處理 10 分鐘。將一滴液滴滴到由 EM 網(wǎng)格上的多孔薄膜支撐的薄碳上。 1分鐘后,對溶液進(jìn)行毛細(xì)作用,用20mM醋酸銨沖洗數(shù)次,毛細(xì)作用,并在液氮泥漿中快速冷凍。然后將樣品冷凍干燥過夜,恢復(fù)至室溫,在真空下轉(zhuǎn)移至 EM,并插入冷卻至 -130°C 的樣品臺中。在高分辨率 Brookhaven 掃描透射 EM (STEM) 中觀察樣品在暗場模式下操作。4

觀察到幾種有趣的脂質(zhì)形式,包括小膠束(圖 2)和明顯破裂的雙層囊泡,從而顯示出單層和雙層(圖 3)。由于沒有使用其他未標(biāo)記的脂質(zhì),并且標(biāo)記實(shí)際上是定量的,因此幾乎每個(gè)脂質(zhì)分子都出現(xiàn)金簇。在這些規(guī)則陣列中觀察到六方密堆積,間距約為 2.5 nm。這大約是金簇的直徑,其核心為 1.4 nm,有機(jī)殼總直徑為 2.7 nm。然而,這比天然雙層中磷脂之間的典型間距(約 1.3 nm)稍大。5

這些方法提供了一種生產(chǎn)規(guī)則金球單層或其他脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的方法。對于生物學(xué)來說,它們可以插入膜中以跟隨膜運(yùn)動(dòng),或用于重建膜蛋白結(jié)構(gòu)以研究脂質(zhì)分布。它們還提供了一種通過銀增強(qiáng)直接可視化脂質(zhì)體的方法,甚至在光學(xué)顯微鏡水平上也是如此。6



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