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為什么 pH 調(diào)整對(duì)于樣品制備方法很重要?

更新時(shí)間:2023-07-25      點(diǎn)擊次數(shù):830

酸解離常數(shù) (pKa) 如何影響樣品制備方法的開(kāi)發(fā)?了解和了解化合物的 pKa 可以告訴您該化合物是否可以電離以及在什么條件下電離,因此您可以利用此特性來(lái)開(kāi)發(fā)更好的樣品制備方法。

解離常數(shù)pKa 是分析物 50% 離子化和 50% 非離子化時(shí)的 pH 值。圖 1 顯示了 pKa 為 8 的酸和堿在 pH 范圍內(nèi)的電離。對(duì)于酸,當(dāng) pH 值升高到高于其 pKa 時(shí),分析物會(huì)電離;而當(dāng) pH 值降低到低于其 pKa 時(shí),分析物不會(huì)電離。電離或非電離發(fā)生在 pKa 上方或下方 2 個(gè)單位處。對(duì)于堿,化合物在高于 pKa 時(shí)非電離,在低于 pKa 時(shí)電離。

當(dāng)我需要開(kāi)發(fā)新的樣品提取方法時(shí),我會(huì)查找測(cè)定中分析物的logP和 pKa,并考慮可能的干擾化合物。

SP-pH調(diào)節(jié)圖 1. pH 對(duì) pKa 為 8 的酸和堿電離的影響。

如果感興趣的化合物可以電離,則可以使用強(qiáng)陽(yáng)離子陰離子    交換 SPE 以保留您的化合物。這些產(chǎn)品通常是鍵合二氧化硅或具有強(qiáng)陽(yáng)離子交換(通常是磺酸根)或陰離子交換(通常是季銨)基團(tuán)的聚合物相,如離子交換 HPLC 柱。由于任一樣品制備柱的主鏈都是反相鍵合硅膠或聚合物,因此它們也具有反相特性,因此可以使用單個(gè) SPE 柱進(jìn)行離子交換或反相保留。這就是術(shù)語(yǔ)“混合模式 SPE"的由來(lái)。離子交換是一種非常強(qiáng)大的保留機(jī)制。帶負(fù)電荷高于其 pKa 的酸性化合物可以承受高 pH 水洗和強(qiáng)有機(jī)洗滌,然后用酸化(通常使用甲酸或乙酸)洗脫溶劑進(jìn)行洗脫。帶正電荷低于其 pKa 的堿性化合物可以耐受酸性洗滌、強(qiáng)有機(jī)洗滌,并用添加堿(通常是氫氧化銨)的有機(jī)溶液洗脫。

對(duì)于含有酸性、堿性和中性化合物的大型尿液藥物組,單次測(cè)定,混合模式聚合物反相強(qiáng)離子交換 SPE 可能是您的選擇。如果您可以用酸(對(duì)于堿)或堿(對(duì)于酸性化合物)處理樣品并將其離子化,則可以通過(guò)離子交換保留離子化的分析物,并通過(guò)反相保留非離子化的化合物。大多數(shù)藥物都是堿性的,因此電離堿性藥物并通過(guò)反相保留中性和酸性是一種常見(jiàn)的策略。使用這些方法時(shí)必須小心有機(jī)洗滌,因?yàn)榉聪啾A舻姆请x子化化合物可能會(huì)在強(qiáng)有機(jī)洗滌中被洗脫。您需要知道化合物的 logP 和 pKa,這樣您就知道哪些化合物被反相保留,哪些化合物被離子交換保留,以及反相機(jī)制保留非離子化化合物的強(qiáng)度。根據(jù)離子交換機(jī)制(陰離子交換為酸性,陽(yáng)離子交換為堿性),用酸性或堿性有機(jī)溶劑完成洗脫。有機(jī)溶劑還洗脫反相保留的化合物。選擇正確的有機(jī)溶劑進(jìn)行洗滌和洗脫對(duì)于優(yōu)化樣品清潔度非常重要。對(duì)于此類(lèi)具有不同性質(zhì)和保留特性的大量化合物的方法來(lái)說(shuō),樣品清潔度和某些分析物的回收率會(huì)受到影響。有機(jī)溶劑還洗脫反相保留的化合物。選擇正確的有機(jī)溶劑進(jìn)行洗滌和洗脫對(duì)于優(yōu)化樣品清潔度非常重要。對(duì)于此類(lèi)具有不同性質(zhì)和保留特性的大量化合物的方法來(lái)說(shuō),樣品清潔度和某些分析物的回收率會(huì)受到影響。有機(jī)溶劑還洗脫反相保留的化合物。選擇正確的有機(jī)溶劑進(jìn)行洗滌和洗脫對(duì)于優(yōu)化樣品清潔度非常重要。對(duì)于此類(lèi)具有不同性質(zhì)和保留特性的大量化合物的方法來(lái)說(shuō),樣品清潔度和某些分析物的回收率會(huì)受到影響。


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